In vitro μελέτη της αντιοξειδωτικής και αντιδιαβητικής δράσης του σπόρου κολοκύθας του είδους Cucurbita moschata

Abstract

Ο κολοκυθόσπορος ή αλλιώς και πασατέμπος αποτελεί συστατικό της Μεσογειακής Διατροφής και καταναλώνεται ευρέως στην Ελλάδα είτε ψημένος είτε ωμός. Αποτελεί πηγή διαφόρων πολύτιμων μακροθρεπτικών και μικροθρεπτικών συστατικών. Επιδημιολογικές μελέτες αποδεικνύουν την προστατευτική δράση των μικροθρεπτικών αυτών συστατικών έναντι χρόνιων νοσημάτων. Αρκετές έρευνες έχουν ασχοληθεί με την ευεργετική επίδραση της κατανάλωσης κολοκύθας του είδους Cucurbita moschata, λίγα όμως βιβλιογραφικά δεδομένα υπάρχουν για τις ευεργετικές επιδράσεις του σπόρου της. Στην βιβλιογραφία δεν υπάρχουν δεδομένα για την αντιοξειδωτική, αντιαθηρογόνο, αντιδιαβητική και αντιθρομβωτική δράση ωμών και ψημένων σπόρων κολοκύθας του είδους Cucurbita moschata. Σκοπός της πτυχιακής εργασίας αυτής είναι να προσδιοριστεί η αντιοξειδωτική, αντιαθηρογόνος, αντιδιαβητική και αντιθρομβωτική δράση των σπόρων κολοκύθας.Χρησιμοποιήθηκαν ωμοί και ψημένοι σπόροι κολοκύθας Λημνιακής προελεύσεως του είδους Cucurbita moschata, οι οποίοι και εκχυλίστηκαν για την παραλαβή των ολικών φαινολικών συστατικών τους. Πριν τη διαδικασία της εκχύλισης έλαβε χώρα επιλογή του κατάλληλου διαλύτη για την παραλαβή των φαινολικών συστατικών. Πραγματοποιήθηκαν συνολικά δύο διαφορετικές μέθοδοι εκχύλισης. Η 1η μέθοδος πραγματοποιήθηκε με ΜeOΗ/H2O: 70/30 με 2% σε οξικό οξύ για την παραλαβή των πολικών μορίων των δειγμάτων τα οποία διαχωρίστηκαν περαιτέρω ως προς την πολικότητά τους με εφαρμογή της μεθόδου Bligh & Dyer. Η 2η μέθοδος που εφαρμόστηκε ήταν η μέθοδος Folch για την παραλαβή μη πολικών μορίων των δειγμάτων και ταυτόχρονο διαχωρισμό τους από τα περισσότερο υδρόφιλα μόρια του δείγματος.Τα οχτώ διαφορετικά εκχυλίσματα των ωμών και ψημένων σπόρων κολοκύθας προερχόμενα από τις 2 διαφορετικές μεθόδους εκχύλισης και το μετέπειτα διαχωρισμό των φάσεων τους, αναλύθηκαν ως προς το πολυφαινολικό τους περιεχόμενο με τη μέθοδο Folin-Ciocalteau.Στο σύνολο των δειγμάτων έγινε εκτίμηση της αντιοξειδωτικής ικανότητας μέσω των δοκιμασιών DPPH, ABTS, FRAP και CUPRAC. Εκτιμήθηκε in vitro η αντιαθηρογόνος δράση μέσω μέτρησης της αναστολής της οξείδωσης πλάσματος από αίμα ανθρώπου που προκλήθηκε από ιόντα Cu2+.Η αντιδιαβητική δράση των εκχυλισμάτων μελετήθηκε in vitro μέσω προσδιορισμού της αναστολής της δραστικότητας του ενζύμου α-γλυκοζιδάση ενώ παράλληλα ελέγθηκε σε πλάσμα ανθρώπου πλούσιο σε αιμοπετάλια (PRP) και η αντιθρομβωτική δράση των εκχυλισμάτων μέσω μέτρησης της αναστολής του θρομβωτικού λιποειδικού παράγοντα γνωστού ως Παράγοντα Ενεργοποίησης των Αιμοπεταλίων (PAF). H πλειονότητα των δειγμάτων έδειξε αντιοξειδωτική, αντιθρομβωτική, αντιοθηρογόνο και αντιδιαβητική δράση. Ο ψημένος σπόρος παρουσίασε ισχυρότερες δραστικότητες συγκριτικά με τον ωμό.

The pumpkin seed is an essential component of the Mediterranean Diet and is widely consumed in Greece either raw or roasted. It is a valuable source of various macronutrients and micronutrients elements. Epidemiological studies have proved the protective action of these micronutrients against chronic diseases. Several studies have dealt with the beneficial effects of the consumption of pumpkin Cucurbita moschata, but few data exist for the beneficial effects of the seed. In the bibliography there are no data on the antioxidant, antiatherogenic, antidiabetic and antithrombotic activity of raw and roasted pumpkin seeds of the kind of Cucurbita moschata. The purpose of this thesis is to determine the antioxidant, antiatherogenic, antidiabetic and antithrombotic activity of pumpkin seeds.Both raw and roasted pumpkin seeds from Cucucrbita moschata species with origin from Limnos Island were used. The seeds were extracted in order to receive the total phenolic compounds. Before proceeding with the extraction, a selection of the most suitable solvent agent, for receiving the phenolic compounds, took place. A total of two different extraction methods took place. In the 1st method ΜeOΗ/H2O: 70/30 with 2% in acetic acid was used in order to extract polar constituents from the samples that were further separated according to their polarity by the Bligh & Dyer method. In the 2nd method extraction the Folch method was used to receive separately the less polar lipid molecules from the more polar molecules of the sample) with a final separation of the two phases created at the end of the extractions. The eight different extracts of raw and roasted pumpkin seeds coming from the two different methods of extraction and subsequent separation of the phases, were analyzed for their polyphenolic content by Folin-Ciocalteau method.Assessment of the antioxidant capacity of the extracts was determined in vitro by the DPPH, ABTS, FRAP and CUPRAC methods. Antiatherogenic activity was studied in vitro by measuring human blood plasma oxidation inhibition Antidiabetic activity of the extracts was evaluated by the inhibition of α-glycosidase activity and the antithrombotic activity of the extracts was determined by the inhibition of the thrombotic lipid mediator known as Platelet Acivating Factor (PAF) in human platelet rich plasma (PRP).The majority of the samples exerted antioxidant, antithrombotic, antiatherogenic and antidiabetic activities. Roasted seeds showed higher activites compared to raw seeds.